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药品研发中热电色谱柱的选择和流动相的优化
点击次数:114 发布时间:2020-03-18
  分析方法的开发主要包括热电色谱柱的选择、流动相的选择、检测波长的选择和梯度的优化几个方面。目前高效液相色谱法(HPLC)多使用反相色谱法,本文主要以反相为例讲解。
 
  1.热电色谱柱的选择
 
  原料药生产对产品的纯度和杂质含量的要求非常苛刻,要求检测使用的热电色谱柱有较高的理论塔板数,能提供更好的分离度,从而对可能存在的杂质有更大的分离的可能性,所以5um填料的色谱柱长要250mm,3.5um填料的柱长要150mm,基本上都是各个粒径柱长最长的。喜欢近两年新出的亚二微米填料的色谱柱,50mm柱长就能提供很高的理论塔板数,而且柱长和粒径小了,流速增加很多,能节省很多的分析时间,极大的提高工作效率。一般选用直径为4.6mm或3.0mm的柱子,太细了可能会增大柱外效应。填料的孔径对于小分子合成药物不需要考虑,普通的分析柱都在100A左右,能满足分析检测的需要。对于API分析方法开发,一般要求必须做色谱柱的筛选实验,最少使用三种不同类型的色谱柱,每种类型三只,要来自于不同厂家。
 
  三种类型包括:1)普通的C18或相应的C8色谱柱,如Waters的SymmetryC18或C8,YMC的PackProC18或C8,Agilent的RXC8等,其它公司如菲罗门和热电也有相应的色谱柱;
 
  2)封端处理的或者极性嵌入型色谱柱,如Waters的SymmetryShieldRP18或RP8,XTerraRP18或RP8,YMC的ODSAQ,Agilent的ZorbaxSBAQ等,其它公司如菲罗门和热电也有相应的色谱柱;
 
  3)填料用其它官能团修饰过的色谱柱,如氨基柱、氰基柱、苯基柱等。一般不同类型的色谱柱在选择性上会有很大的差异,相同类型的色谱柱生产厂家不同在选择性上也会有差异,这个主要是填料的性质和生产工艺决定的,有时候用一只色谱柱分离不好,除了优化梯度和流动相外,换一个厂家的柱子也是一个很好的选择。
 
  相同品牌型号的色谱柱,C18和C8在选择性上没有差异,但是C18保留能力更强,相同的样品分离度更高,我们一般倾向于选择用C18。我们在筛选色谱柱时尽量选择行业内排名前几位的厂家,柱子品质好,开发分析方法时能省很多力气,做出来的分析方法也有保证。一个药从开发到上市可能会持续十几年甚至更长时间,厂家有实力,开发方法时选定的柱子在若干年以后需要时还会有的买,做分析时重复性也能保障。多用几只色谱柱做筛选和分析方法优化,能尽大的可能提高分析方法的质量,保证检测结果的可信度。
 
  常用的柱子有:Agilent的ZorbaxEclipseXDB-C18、ZorbaxEclipsePlusC18,Waters的SymmetryC18、XTerraRP18、XTerraMSC18等,YMC的柱子有时会是不错的备用选择,菲罗门的柱子菲罗门的柱子国内外市场占有率较高,但是感觉柱子压力高,寿命短,尽量不用,热电的柱子用的也不少,但没什么感觉。制剂分析方法选择色谱柱的要求基本和API相一样,对于中间体和生产过程中反应跟踪(IPC)分析方法开发使用的色谱柱,一般会根据样品性质直接选取一两只普通C18或者封端处理过的色谱柱,简化筛选过程。
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