药品研发中热电色谱柱的选择和流动相的优化
更新更新时间：2020-03-18
浏览次数：982
分析方法的开发主要包括热电色谱柱的选择、流动相的选择、检测波长的选择和梯度的优化几个方面。目前高效液相色谱法(HPLC)多使用反相色谱法，本文主要以反相为例讲解。
1.热电色谱柱的选择
原料药生产对产品的纯度和杂质含量的要求非常苛刻，要求检测使用的热电色谱柱有较高的理论塔板数，能提供更好的分离度，从而对可能存在的杂质有更大的分离的可能性，所以5um填料的色谱柱长要250mm，3.5um填料的柱长要150mm，基本上都是各个粒径柱长长的。喜欢近两年新出的亚二微米填料的色谱柱，50mm柱长就能提供很高的理论塔板数，而且柱长和粒径小了，流速增加很多，能节省很多的分析时间，极大的提高工作效率。一般选用直径为4.6mm或3.0mm的柱子，太细了可能会增大柱外效应。填料的孔径对于小分子合成药物不需要考虑，普通的分析柱都在100A左右，能满足分析检测的需要。对于API分析方法开发，一般要求必须做色谱柱的筛选实验，少使用三种不同类型的色谱柱，每种类型三只，要来自于不同厂家。
三种类型包括：1)普通的C18或相应的C8色谱柱，如Waters的SymmetryC18或C8，YMC的PackProC18或C8，Agilent的RXC8等，其它公司如菲罗门和热电也有相应的色谱柱；
2)封端处理的或者极性嵌入型色谱柱，如Waters的SymmetryShieldRP18或RP8，XTerraRP18或RP8，YMC的ODSAQ，Agilent的ZorbaxSBAQ等，其它公司如菲罗门和热电也有相应的色谱柱；
3)填料用其它官能团修饰过的色谱柱，如氨基柱、氰基柱、苯基柱等。一般不同类型的色谱柱在选择性上会有很大的差异，相同类型的色谱柱生产厂家不同在选择性上也会有差异，这个主要是填料的性质和生产工艺决定的，有时候用一只色谱柱分离不好，除了优化梯度和流动相外，换一个厂家的柱子也是一个很好的选择。
相同品牌型号的色谱柱，C18和C8在选择性上没有差异，但是C18保留能力更强，相同的样品分离度更高，我们一般倾向于选择用C18。我们在筛选色谱柱时尽量选择行业内*几位的厂家，柱子品质好，开发分析方法时能省很多力气，做出来的分析方法也有保证。一个药从开发到上市可能会持续十几年甚至更长时间，厂家有实力，开发方法时选定的柱子在若干年以后需要时还会有的买，做分析时重复性也能保障。多用几只色谱柱做筛选和分析方法优化，能尽大的可能提高分析方法的质量，保证检测结果的可信度。
常用的柱子有：Agilent的ZorbaxEclipseXDB-C18、ZorbaxEclipsePlusC18，Waters的SymmetryC18、XTerraRP18、XTerraMSC18等，YMC的柱子有时会是不错的备用选择，菲罗门的柱子菲罗门的柱子国内外*较高，但是感觉柱子压力高，寿命短，尽量不用，热电的柱子用的也不少，但没什么感觉。制剂分析方法选择色谱柱的要求基本和API相一样，对于中间体和生产过程中反应跟踪(IPC)分析方法开发使用的色谱柱，一般会根据样品性质直接选取一两只普通C18或者封端处理过的色谱柱，简化筛选过程。
