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生物发光技术

更新更新时间:2021-08-09

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生物发光技术
                                                       上海连桥生物科技有限公司
                      原理

生物发光是生物体内一种特定酶催化,将生物化学能转化为光能的化学发光现象。生物发光技术通过将荧光酶基因整合到预期观察的细胞染色体DNA中以表达荧光素酶,然后培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株。将标记好的细胞接种到实验动物体内后,当外源(腹腔或静脉注射)给予其第五荧光素(luciferin),在生物体内环境中三磷酸腺苷(ATP)、O2及Mg2+存在的条件下,荧光素酶催化底物荧光素发生氧化脱羧反应,释放可见光能,从而实现生物发光(偏红色),通过电荷耦合器件(CCD)设备等生物光学成像系统进行检测,即生物发光活体成像技术(BLI)。基因、细胞和活体动物都可被荧光素酶基因标记。荧光素酶在标记细胞内的表达可以直接指示细胞在体内的活动和反应,其中ATP提供生化反应所需的能量,即该反应必须在活细胞内才会存在和产生发光现象,且发光强度与标记细胞的数目线性相关

这种无需激发就可发出的生物荧光,组织穿透能力强,灵敏度高,由于没有激发光的非特应性干扰,信躁比较高。

应用

生物发光技术因具有*的灵敏度,便于对疾病动物模型微小病灶进行检测,而且不涉及反射性有害物质,安全系数高,实验结果直观,可精确定量,重现性好,操作简单,得到迅速发展。目前该技术已应用于医疗卫生、食品、环境等领域,尤其在抗肿瘤领域应用极为广泛,实现了在活体内实时、连续地对肿瘤细胞生长、浸润、转移等恶性生物学行为的检测,也可进行药物选择及个体化治疗。

由于荧光素酶的活性和稳定性受很多因素影响,如缓冲液种类、温度、PH、金属离子、酶浓度及发光测定时间等,尤其PH对其影响对大,在使用中需要加以注意。

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