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浅析沃特世色谱柱平衡缓冲液的选择
点击次数:230 发布时间:2019-10-14
     沃特世色谱柱是以高纯度具有良好机械稳定性的硅胶为基质,通过使用高纯度键合试剂在硅胶上键合季铵强阴离子交换基团,具有季铵和苯基官能团的混合化学结构。这种强阴离子交换相与疏水相的混合模式可以为各种有机化合物如芳香族或脂肪族羧酸和磺酸等提供和高选择性的分离。硅胶:球形, 高纯度(金属杂质10ppm)
 
    沃特世色谱柱洗脱液的选择
 
    阴离子交换色谱柱的选择:
 
    离子交换色谱柱通常粗短,直径和长度比一般为1:10~1:50。
 
    沃特世色谱柱装柱:
 
    1、色谱柱安装要垂直。
 
    2、装柱时要均匀平整,不能有气泡。
 
    平衡缓冲液的选择:
 
    平衡缓冲液是指装柱后和上样后用于平衡离子交换色谱柱的缓冲液。
 
    平衡缓冲液的离子强度和pH值要保证各个待分离物质的稳定,要使各个待分离物质与离子交换剂有适当的结合,并尽量使待分离物质和杂质与离子交换剂的结合有较大的差别。
 
    沃特世色谱柱上样:
 
    上样方式有正上柱和反上柱。
 
    上样时注意样品液的离子强度和pH值,上样量应小于工作交换量。
 
    沃特世色谱柱洗脱:
 
    1、洗脱液的选择:
 
    (1)保证所有组分在洗脱液梯度范围内都是稳定的。
 
    (2)要使结合在离子交换剂上的所有组分在洗脱液梯度范围内都能够被洗脱。
 
    (3)梯度范围尽量小一些,以提高分辨率。
 
    2、洗脱方式:
 
    离子交换色谱一般采用梯度洗脱,通常有改变离子强度和改变pH值两种洗脱方式。
 
    (1)改变离子强度的洗脱:
 
    在洗脱过程中逐步增大离子强度,从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来。
 
    (2)改变pH值的洗脱:
 
    阳离子交换剂一般是pH值从低到高洗脱,阴离子交换剂一般是pH值从高到低洗脱。
 
    由于pH值可能对蛋白的稳定性有较大的影响,一般采用改变离子强度进行洗脱。
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